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Benutzerdefinierter Expressionsservice für prokaryotisches Protein

Updatezeit : 2021-02-24

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Benutzerdefinierter Expressionsservice für prokaryotisches Protein
Das prokaryotische Proteinexpressionssystem verwendet im Allgemeinen E. coli als Wirtszelle. Aufgrund der Vorteile einer schnellen Zellproliferation, einer hohen Expression, einer bequemen Reinigung, einer guten Stabilität, einer starken Anti-Verschmutzungsfähigkeit und geringen Kosten ist das prokaryotische Proteinexpressionssystem das ausgereifteste und zuverlässigste und es ist auch das am häufigsten verwendete und wirtschaftlichste Expressionssystem in Proteinexpressionsexperimenten.
prokaryotic protein expression system
Das prokaryotische Proteinexpressionssystem weist jedoch auch einige Schwierigkeiten auf. Beispielsweise führen die Codonverwendungspräferenz der codierenden Region des zu exprimierenden Gens oder die Inkompatibilität der regulatorischen Elemente auf dem Vektor mit den Wirtsbakterien zu der Unfähigkeit oder geringen Expression des Zielproteins, und sogar das Zielprotein ist unlöslich obwohl der Ausdruck erfolgreich ist.

Mit Hilfe einer branchenführenden Codon-Optimierungssoftware und unserer mehr als zehnjährigen Erfahrung in der Proteinoptimierung und Expressionsreinigung bietet Ihnen Generalbiosystems professionelle technische Unterstützung in allen Aspekten der prokaryotischen Expression und stellt nicht nur die Expression Ihres Zielproteins It sicher Sie können auch hochreine Lieferprodukte gemäß Ihren Anforderungen sicherstellen, sodass Sie sich auf nachfolgende Experimente konzentrieren können!

Kundenspezifischer Inhalt des prokaryotischen Proteinexpressionsdienstes


Expressionsvektorkonstruktion (optional)

Einschließlich Codonoptimierung, Gensynthese und Subklonierung.

Nachdem die Gensequenz durch die branchenführende Software von Generalbiosystems optimiert wurde, kann die Proteinexpression um das Mehrere- bis Zehnfache erhöht werden.

Generalbiosystems kann Kunden eine Vielzahl gängiger kommerzieller Vektoren wie pET, pCOLD usw. zur Verfügung stellen. Darüber hinaus nutzt Generalbiosystems leistungsstarke Konstruktionsfunktionen für synthetische Biologiekomponenten, um die pSYNO-Reihe prokaryotischer Expressionsvektoren wie Sumo, MBP, GST, zu optimieren und zu transformieren. Trx und andere prokaryotische Ausdrucks-Tags für Ihre Wahl. Bitte kontaktieren Sie sales@biolytic.cn für Details.


Optimierung der Expressionsbedingungen

Unter der Voraussetzung, dass die Sequenz korrekt ist, hat der Wirtsstamm einen sehr offensichtlichen Einfluss auf den Expressionseffekt.

Generalbiosystems transformiert rekombinante Plasmide in eine Vielzahl von Expressionswirtsbakterien, einschließlich BL21 (DE3), ArcticExpress (DE3), Rosetta (DE3) pLySs, Rosetta-gami B (DE3) und anderer charakteristischer Stämme.

Nach der Transformation wurden mindestens 6 positive Klonplasmide für den Expressionstest und die Optimierung ausgewählt.

Während des kleinen Tests werden wir die Kulturbedingungen optimieren und testen, die für verschiedene Stämme geeignet sind, einschließlich Faktoren wie Temperatur, Medium, Induktortyp, Induktionszeit und Induktionsmenge. Ermitteln Sie das Expressionsniveau und die Löslichkeit mittels SDS-PAGE und geben Sie Vorschläge zur Machbarkeit, ob eine Vergrößerung oder eine Vergrößerung erforderlich ist.


Proteinamplifikation, Expression und Reinigung

Verwenden Sie 1 l oder eine größere Kulturskala, um die Expression von rekombinanten Bakterien zu induzieren. Führen Sie nach der Kultur und Induktion eine einstufige Affinitätsreinigung oder einen Ionenaustausch, eine hydrophobe und eine mehrstufige Gelreinigung durch (optional oder mehrfach wählbar). Standardmäßig erkennt SDS-PAGE die Reinheit und Western Blot die Korrektheit (optional stellen Kunden verifizierte Primärantikörper zur Verfügung).

Proteinnachbearbeitung (optional)

Für Proteine mit weiteren speziellen Anforderungen bietet Generalbiosystems eine Vielzahl von Nachbearbeitungsoptionen, darunter Etikettenentfernung, Filtrationssterilisation, Endotoxinentfernung, Gefriertrocknung, N-terminale Sequenzierung und andere Dienstleistungen für gereinigtes Protein. Für Ihre speziellen Bedürfnisse können unsere erfahrenen Ingenieure Ihnen maßgeschneiderte Post-Services anbieten.